ಆಣ್ವಿಕ ಜೈವಿಕ ಸಂಶೋಧನಾ ವಿಧಾನಗಳು ಮತ್ತು ಅವುಗಳ ಬಳಕೆಯು

ಆಣ್ವಿಕ ಜೈವಿಕ ಸಂಶೋಧನಾ ವಿಧಾನಗಳು ಆಧುನಿಕ ವೈದ್ಯಕೀಯ, ನ್ಯಾಯ ವಿಜ್ಞಾನ, ಮತ್ತು ಜೀವಶಾಸ್ತ್ರದಲ್ಲಿನ ಒಂದು ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರವನ್ನು ವಹಿಸುತ್ತದೆ. DNA ಮತ್ತು RNA ಅಧ್ಯಯನ ಕ್ಷಿಪ್ರ ಧನ್ಯವಾದಗಳು, ವ್ಯಕ್ತಿ ಆಮ್ಲಗಳು, ಇತ್ಯಾದಿ ಮಿಶ್ರಿತವಾಗಿ ಬಯಸಿದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಗುರುತಿಸಲು, ಉತ್ಪಾದಕ ಏಜೆಂಟ್ ಜೀವಿಯ ಜಿನೊಮ್ ಅನ್ವೇಷಿಸಲು ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗುತ್ತದೆ

ಆಣ್ವಿಕ-ಜೈವಿಕ ವಿಧಾನಗಳು. ಇದು ಏನು?

ಬ್ಯಾಕ್ ವಿಜ್ಞಾನಿಗಳ 70-80s ಅರ್ಥ ಮಾಡುವುದು ಮೊದಲ ಮಾನವ ಜಿನೊಮ್. ಈ ಈವೆಂಟ್ ಜೆನೆಟಿಕ್ ಇಂಜಿನಿಯರಿಂಗ್ ಮತ್ತು ಅಣು ಜೀವವಿಜ್ಞಾನ ಅಭಿವೃದ್ಧಿಗೆ ಪ್ರೇರಣೆಯಾಯಿತು. DNA ಮತ್ತು RNA ಗುಣಗಳನ್ನು ಸ್ಟಡಿ ಇದು ರೋಗ, ಅಧ್ಯಯನ ಜೀನ್ನ ಉದ್ದೇಶಕ್ಕಾಗಿ ಈ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳು ಬಳಸಲು ಸಾಧ್ಯವಾಗುತ್ತದೆ ಎಂದು ಅರ್ಥ.

DNA ಮತ್ತು RNA ತಯಾರಿಸುವುದು

ಆಣ್ವಿಕ ಜೈವಿಕ ರೋಗನಿರ್ಣಯದ ವಿಧಾನಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಈ: ವಸ್ತು ಪ್ರಾರಂಭಿಸಿ ಅಗತ್ಯವಿದೆ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ. ಜೀವಿಗಳ ಜೀವಕೋಶಗಳಿಂದ ಈ ವಸ್ತುಗಳು ಆಯ್ಕೆ ಹಲವಾರು ಮಾರ್ಗಗಳಿವೆ. ಪ್ರತಿ ಅನುಕೂಲಗಳನ್ನು ಮತ್ತು ಅನನುಕೂಲಗಳನ್ನು ಹೊಂದಿದೆ, ಮತ್ತು ಶುದ್ಧ ರೂಪದಲ್ಲಿ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳು ಪ್ರತ್ಯೇಕವಾಗಿಸುವ ವಿಧಾನವನ್ನು ಆಯ್ಕೆಮಾಡುವಾಗ ಇದು ಪರಿಗಣಿಸಬೇಕು.

1. Marmur ಮೂಲಕ ತಯಾರಿ ಡಿಎನ್ಎ. ವಿಧಾನ, ಮದ್ಯ ಪದಾರ್ಥಗಳ ಮಿಶ್ರಣವನ್ನು ಚಿಕಿತ್ಸೆಯಲ್ಲಿ ಒಳಗೊಂಡಿದೆ ಶುದ್ಧ ಡಿಎನ್ಎ ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ತ್ವರಿತಗೊಳಿಸುತ್ತದೆ. ಈ ವಿಧಾನದ ತೊಂದರೆಯೂ ನಾಶಕಾರಿ ವಸ್ತುಗಳು, ಫೀನಾಲ್ ಮತ್ತು ಕ್ಲೋರೋಫಾರ್ಮ್ ಬಳಕೆ.

2. ಬೂಮ್ ನಂತರ DNA ಬೇರ್ಪಡಿಸುವಿಕೆ. ಇಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಮುಖ್ಯ ವಸ್ತುವಿನ - guanidine thiocyanate (GuSCN) ಆಗಿದೆ. ಇದು ಶೇಖರಣೆ ಉತ್ತೇಜಿಸುತ್ತದೆ ಡೀಆಕ್ಸಿರೈಬೊ ನ್ಯೂಕ್ಲೀಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಸ್ಪೆಷಲ್ ಬಫರ್ ನೆರವಿನಿಂದ ಇದನ್ನು ತದನಂತರ ಸಂಗ್ರಹಿಸಿದ ಮಾಡಬಹುದಾದಂತಹ ವಿಶೇಷ ಅಧಃಸ್ತರಗಳಲ್ಲಿ,. ಆದಾಗ್ಯೂ GuSCN - ಟಿಸಿಪಿ ಒಂದು ನಿರೋಧಕಗಳು, ಮತ್ತು ಒಂದು ಸಣ್ಣ ಭಾಗವನ್ನು ಡಿಎನ್ಎ ಠೇವಣಿ ಸಿಗುತ್ತದೆ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲಗಳು ಕೆಲಸ ಪ್ರಮುಖ ಇದು ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಸರಣಿ ಕ್ರಿಯೆ, ಸಹಜವಾಗಿ ಪ್ರಭಾವಿಸುತ್ತವೆ.

3. ಕಲ್ಮಶಗಳ ವಾತಾವರಣ. ವಿಧಾನವನ್ನು ಕಣಗಳಿಗೆ ತಮ್ಮನ್ನು dehoksiribonukleinovoy ಆಮ್ಲ ಮತ್ತು ಕಲ್ಮಶಗಳನ್ನು ಠೇವಣಿ ಇಲ್ಲ ಹಿಂದಿನ ಪದಗಳಿಗಿಂತ ಭಿನ್ನವಾಗಿದೆ. ಇದನ್ನು ಮಾಡಲು, ಅಯಾನು ವಿನಿಮಯಕಾರಕಗಳು ಬಳಸಿ. ಅನನುಕೂಲವೆಂದರೆ ಎಲ್ಲಾ ಪದಾರ್ಥಗಳನ್ನು ಇತ್ಯರ್ಥ ಮಾಡುತ್ತದೆ.

4. ಮಾಸ್ ಸ್ಕ್ರೀನಿಂಗ್. ನೀವು ರಚನೆಯ DNA ಕಣ, ಮತ್ತು ಕೆಲವು ಅಂಕಿಅಂಶಗಳನ್ನು ಪಡೆಯಲು ಬಗ್ಗೆ ನಿಖರ ಮಾಹಿತಿಗಳಿಲ್ಲ ಅಗತ್ಯವಿಲ್ಲ ಮಾಡಿದಾಗ ಈ ವಿಧಾನವು ಸಂದರ್ಭಗಳಲ್ಲಿ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಕಾರಣಕ್ಕಾಗಿ ಮಾರ್ಜಕಗಳು, ವಿಶೇಷವಾಗಿ alkalies ನಿರ್ವಹಿಸಬೇಕಾದರೆ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ ರಚನೆ ಹಾನಿಗೊಳಗಾಗಬಹುದು ಎಂಬುದು.

ಸಂಶೋಧನಾ ವಿಧಾನಗಳು ವರ್ಗೀಕರಣ

ಸಂಶೋಧನೆಯ ಎಲ್ಲ ಜೀವಾಣು-ಜೈವಿಕ ವಿಧಾನಗಳು ಮೂರು ಪ್ರಮುಖ ಗುಂಪುಗಳಾಗಿ ವಿಂಗಡಿಸಲಾಗಿದೆ:

1. ವರ್ಧನೆಯ (ಕಿಣ್ವಗಳ ಒಂದು ಬಹುಸಂಖ್ಯಾ ಬಳಸಿ). ರೋಗನಿರ್ಣಯದ ವಿಧಾನಗಳು ಒಂದು ಪ್ರಮುಖ ಪಾತ್ರವಹಿಸಿರುವ ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಸರಣಿ ಕ್ರಿಯೆ, - ಇದನ್ನು PCR ಒಳಗೊಂಡಿದೆ.

2. Neamplifikatsionnye. ವಿಧಾನಗಳ ಈ ಗುಂಪು ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಮಿಶ್ರಣಗಳನ್ನು ಕೆಲಸ ನೇರವಾಗಿ ಸಂಬಂಧಿಸಿದೆ. ಉದಾಹರಣೆಗಳು ಸಿಟು ಬೆರಕೆಯ, ಮುಂತಾದವುಗಳಲ್ಲಿ 3 ರೀತಿಯ blots ಇವೆ

ನಿರ್ದಿಷ್ಟ DNA ಅಥವಾ RNA ತನಿಖೆಗೆ ಬಂಧಿಸುವ ತನಿಖೆ ಅಣು ಸಿಗ್ನಲ್ ಗುರುತಿಸುವಿಕೆಯ ಮೇಲೆ ಆಧಾರಿತ 3. ವಿಧಾನಗಳು. ಉದಾಹರಣೆ - ಸಂಕರೀಕರಣ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ Hybride ಕ್ಯಾಪ್ಚರ್ ವ್ಯವಸ್ಥೆ ಪರಿಹಾರ (hc2).

ಆ ಆಣ್ವಿಕ ಜೈವಿಕ ಸಂಶೋಧನಾ ವಿಧಾನಗಳು ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ ಕಿಣ್ವಗಳು

ಅನೇಕ ಆಣ್ವಿಕ ರೋಗನಿರ್ಣಯ ತಂತ್ರಗಳನ್ನು ಕಿಣ್ವಗಳ ವ್ಯಾಪಕ ಬಳಕೆಯನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿರುತ್ತದೆ. ಕೆಳಗೆ ಹೆಚ್ಚಾಗಿ ಬಳಸಲಾಗಿದೆ:

1. ನಿರ್ಬಂಧದ ಕಿಣ್ವ - ಅಗತ್ಯ ಭಾಗಗಳಿಗೆ DNA ಕಣ "ಕಟ್".

2. DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ - ಒಂದು ಎರಡು-ತಂತುಗಳ ಡೀಆಕ್ಸಿರೈಬೊ ನ್ಯೂಕ್ಲೀಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಅಣು ಸಂಯೋಜಿಸುತ್ತದೆ.

3. ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್ (ರಿವರ್ಸ್ ಟ್ರಾನ್ಸ್ಕ್ರಿಪ್ಟೇಸ್) - ಒಂದು ಆರ್ಎನ್ಎ ಟೆಂಪ್ಲೇಟ್ ಡಿಎನ್ಎ ಸಂಶ್ಲೇಷಿಸಲಾಗುತ್ತದೆ.

4. ಡಿಎನ್ಎ ಲೈಗೇಸ್ - ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ಗಳು ನಡುವೆ phosphodiester ಬಂಧಗಳು ರಚನೆಗೆ ಕಾರಣವಾಗಿದೆ.

5. ಎಕ್ಸೊನೂಕ್ಲಿಯೇಸ್ - ಡೀಆಕ್ಸಿರೈಬೊ ನ್ಯೂಕ್ಲೀಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಅಣು ಕೊನೆಯಲ್ಲಿ ಭಾಗಗಳಿಂದ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ಗಳು ತೆಗೆದುಹಾಕುತ್ತದೆ.

ಪಿಸಿಆರ್ - ಡಿಎನ್ಎ ವರ್ಧನೆ ಮೂಲ ವಿಧಾನವು

ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಚೈನ್ ರಿಯಾಕ್ಷನ್ (PCR) ವ್ಯಾಪಕವಾಗಿ ಆಧುನಿಕ ಅಣು ಜೀವಶಾಸ್ತ್ರ ಬಳಸಲಾಗುತ್ತದೆ. ಒಂದೇ DNA ಕಣ ಪ್ರತಿಗಳನ್ನು (ವಿಸ್ತರಿಸುತ್ತಾ ಮಾಲಿಕ್ಯೂಲ್) ಒಂದು ದೊಡ್ಡ ಸಂಖ್ಯೆಯಲ್ಲಿ ಪಡೆಯಬಹುದು ಇದರಲ್ಲಿ ಈ ಪದ್ಧತಿ.

ಪಿಸಿಆರ್ ಮುಖ್ಯ ಕಾರ್ಯಚಟುವಟಿಕೆಗಳು:

- ರೋಗಗಳ ಪತ್ತೆಯಲ್ಲಿ;

- ಡಿಎನ್ಎ ಭಾಗಗಳು ಅಬೀಜ ಸಂತಾನೋತ್ಪತ್ತಿ, ಜೀನ್.

ಕೈಗೊಳ್ಳಲು ಪಾಲಿಮರೇಸ್ ಸರಣಿ ಕ್ರಿಯೆಯ ಕೆಳಗಿನ ಅಂಶಗಳನ್ನು ಅಗತ್ಯವಿದೆ: ಆರಂಭಿಕ DNA ಕಣ, ಒಂದು thermostable DNA ಪಾಲಿಮರೇಸ್ (Taq ಅಥವಾ Pfu), deoxyribonucleotide ಫಾಸ್ಫೇಟ್ಗಳು (ಸಾರಜನಕ ನೆಲೆಗಳ ಮೂಲಗಳು), ಪ್ರೈಮರ್ಗಳನ್ನು (2 ಪ್ರೈಮರ್ 1 DNA ಕಣ) ಮತ್ತು ಸ್ವತಃ ಆಯೋಜಿಸಬಹುದು ಒಂದು ಬಫರ್ ವ್ಯವಸ್ಥೆಯ ಎಲ್ಲಾ ಪ್ರತಿಕ್ರಿಯೆಗಳು.

ಸ್ವಭಾವ ಕಳೆದುಕಳೆಯುವಿಕೆ, ಪ್ರೈಮರ್ ಹದಗೊಳಿಸುವಿಕೆ ಮತ್ತು ದೀರ್ಘೀಕರಣ: ಪಿಸಿಆರ್ ಮೂರು ಹಂತಗಳನ್ನು ಒಳಗೊಂಡಿದೆ.

1. ಸ್ವಭಾವ ಕಳೆದುಕಳೆಯುವಿಕೆ. ಆಫ್ 94-95 ಡಿಗ್ರಿ ಸೆಲ್ಸಿಯಸ್ proshodit ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಡಿಎನ್ಎ ಎರಡು ಸರಣಿಗಳು ನಡುವಿನ ಜಲಜನಕ ಬಂಧ ವನ್ನು ಒಡೆಯುತ್ತವೆ ಮತ್ತು ಪರಿಣಾಮವಾಗಿ ನಾವು ಎರಡು ಏಕೈಕ-ತಂತುವಿನ ಅಣುಗಳು ಪಡೆಯಿರಿ.

2. ಕಾವಿನಿಂದ ಹದಮಾಡಿದ್ದು ಪ್ರೈಮರ್ಗಳನ್ನು. 50-60 ಡಿಗ್ರಿ ತಾಪಮಾನದಲ್ಲಿ ಸೆಂಟಿಗ್ರೇಡು ಕಾಂಪ್ಲಿಮೆಂಟಾರಿಟಿ ವಿಧಗಳನ್ನು ಏಕೈಕ-ತಂತುವಿನ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಅಣುಗಳ ತುದಿಗಳಲ್ಲಿ ಸೇರ್ಪಡೆಯ ಪ್ರೈಮರ್ಗಳನ್ನು ಸಂಭವಿಸುತ್ತದೆ.

3. ದೀರ್ಘೀಕರಣ. 72 ಡಿಗ್ರಿ ತಾಪಮಾನ ವಿಶ್ಲೇಷಣೆಗೊಳ್ಳಲ್ಪಡುತ್ತವೆ ಮಗಳು ಡಬಲ್ ಡೀಆಕ್ಸಿರೈಬೊ ನ್ಯೂಕ್ಲೀಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಅಣುಗಳು ಸಿಕ್ಕಿಬಿದ್ದ.

ಡಿಎನ್ಎ ಅನುಕ್ರಮ

ಆಣ್ವಿಕ ಜೈವಿಕ ಸಂಶೋಧನಾ ವಿಧಾನಗಳು ಸಾಮಾನ್ಯವಾಗಿ ಡೀಆಕ್ಸಿರೈಬೊ ನ್ಯೂಕ್ಲೀಯಿಕ್ ಆಮ್ಲ ಪರಮಾಣುವಿನ ನ್ಯೂಕ್ಲಿಯೋಟೈಡ್ಗಳು ಅನುಕ್ರಮ ಜ್ಞಾನ ಅಗತ್ಯವಿರುತ್ತದೆ. ನಿರ್ಧರಿಸಲು ಆನುವಂಶಿಕ ಕೋಡ್ ಅನುಕ್ರಮಗೊಳಿಸಲಾದ. ಭವಿಷ್ಯದ ಆಣ್ವಿಕ ರೋಗನಿದಾನ ಜ್ಞಾನವನ್ನು ಮಾನವ ಅನುಕ್ರಮವು ನಿರ್ಣಯಿಸುವಲ್ಲಿ ಪಡೆಯಿತು ಆಧರಿಸಿ ನಡೆಯಲಿದೆ.

ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್ ಕೆಳಕಂಡ ವಿಧಗಳು:

• Maxam-ಗಿಲ್ಬರ್ಟ್ ಮೂಲಕ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್;
• ಸ್ಯಾಂಗರ್ ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್;
• pyrosequencing;
• nanoporovoe ಸೀಕ್ವೆನ್ಸಿಂಗ್.